jazyk / language:
Interactive Conference
of Young Scientists
Back to section

Príprava konštruktu na expresiu ľahkého reťazca ľudskej enterokinázy v kvasinke Candida utilis


Go to the discussion

Príprava konštruktu na expresiu ľahkého reťazca ľudskej enterokinázy v kvasinke Candida utilis

Nikola Mojtova 1 Martin Šafranek 1 Veronika Lišková 1 Eva Struhárňanská 1 Ján Krahulec 1

1Univerzita Komenského v Bratislave, Prírodovedecká fakulta, Katedra molekulárnej biológie, Mlynská dolina, Ilkovičova 6, 842 15 Bratislava
mojtovan@gmail.com

Candida utilis bola schválená ako GRAS mikroorganizmus (všeobecne uznávaný ako bezpečný) od F.D.A. (Úrad pre potraviny a liečivá) a jej výhodnou vlastnosťou je, že jej sekretóm neobsahuje proteolytické enzýmy, ktoré sú v médiu nežiadúce z dôvodu náročnejšej purifikácii a možnej degradácii produktu. Na riadenie expresie heterológnych proteínov v expresnom systéme Candida utilis, je možné využiť konštitutívny promótor glyceraldehyd-3-fosfátdehydrogenázy GAP, pretože neinhibuje rast a nie je toxický pre bunky. Enterokináza je serínová proteáza a je ideálnym nástrojom na štiepenie rekombinantne produkovaných fúznych proteínov, pretože po štiepení N-terminálneho peptidu v sekvencii (Asp)4Lys, nezanecháva na rekombinantnom proteíne aminokyselinové zvyšky. Cieľom práce bolo optimalizovať využitie kodónov v sekvencii enterokinázy pre kvasinku C. utilis a následne pripraviť konštrukt pGAP-EKop vložením génu kódujúceho enterokinázu bez rozpoznávacích sekvencií pre proteázy Kex2 a Ste13.

Táto práca bola pripravená na základe podpory APVV-0119-12 a vďaka podpore v rámci operačného programu Výskum a inovácie pre projekt: Univerzitný vedecký park Univerzity Komenského v Bratislave – 2. Fáza, ITMS 2014+ 313021D075, spolufinancovaný zo zdrojov Európskeho fondu regionálneho rozvoja. A príprava biologicky aktívnych látok na báze rekombinantných proteínov” (BIOREKPROT – ITMS: 26240220048), projekt: „Rozvoj centra excelentnosti pre využitie informačných biomakromolekúl na zlepšenie kvality života“ (BIOMAKRO2 - ITMS 26240120027), financovaných zo zdrojov ERDF, projekt „Priemyselný výskum nových liečiv na báze rekombinantných proteínov“ (Rekprotein - ITMS: 26240220034), financovaných zo zdrojov ERDF.
[1] Domínguez A., Fermiñán E., Sánchez N., et al. (1998) Int. Microbiol. 1(2), p. 131.
[2] Buerth C., Heilmann J. C., Klis F. M., et al. (2011) Microbiol. 157, p. 2493.
[3] Lu D., Futterer K., Korolev S., et al. (1999) J. Mol. Biol. 292(2), p. 29.
[4] Huang L., Ruan H., Gu W., et al. (2007) Prep. Biochem. Biotecjnol. 37(3), p.205.
It appears that your web browser does not support PDF documents viewing

Discussion

konštrukt pGAP-EKop 09.05.2018 07:23
Dobry den, zaujimala by ma dalsia etapa vasho vyskumu, co sa bude dalej diat s výsledným konštruktom pGAP-EKop, ake dalsie experimenty s nim planujete, ako hlbsie sa da tato tematika rozvijat? Vopred daku...Show all comments
Re: konštrukt pGAP-EKop 14.05.2018 08:43
Dobry den, nasledujucim krokom bude klonovanie tohto plazmidu kvasinkovými bunkami C. utilis. Po uspesnej transformacii bude nasledovat vyber vhodných klonov na expresiu. Nasledne tieto klony otestujeme ba...Show all comments
Spolupráca 25.05.2018 22:24
Dobrý deň, pekná práca - zaujíma ma, či na tejto problematike spolupracujete s nejakým zahraničným tímom, keďže sa rekombinantné kmene C.u. (a iných mikroorganizmov) čoraz viac začínajú št...Show all comments
Re: Spolupráca 27.05.2018 11:11
Dobrý deň, bohužiaľ nespolupracujeme zatiaľ s nikým iným ale snažíme sa vytvoriť expresný systém založený na C. utilis a dúfame, že by sa nám mohli v budúcnosti otvoriť dvere aj do zahrani...Show all comments
Re: Spolupráca 27.05.2018 11:11
Re: Re: Spolupráca 27.05.2018 11:16
Ďakujem za odpoveď a budem držať palce :)
iwa
Re: Spolupráca 27.05.2018 11:21
Ďakujem :)
Nikola Mojtová
Partners
General partner

Partners
Special thanks
Media partners
Inzercia zadarmo
Organizer