jazyk / language:
Interactive Conference
of Young Scientists
Back to section

Štúdium redoxnej regulácie mitochondriových chloridových kanálov kardiomyocytov

Discussion interaction
Overall design
Scientific work
Show all evaluations

Go to the discussion

Štúdium redoxnej regulácie mitochondriových chloridových kanálov kardiomyocytov

Jana Havlíková 1 Marián Grman 2

1Fakulta matematiky, fyziky a informatiky, Univerzita Komenského v Bratislave
2Ústav klinického a translačného výskumu, Biomedicínske centrum, Slovenská akadémia vied, Bratislava
janka.havlik@gmail.com

Mitochondria je bunková organela, v ktorej prebieha životne dôležitý proces tvorby energie – oxidačná fosforylácia. Kyslík, ako jedna z kľúčových molekúl v tomto procese, je vysoko reaktívna molekula, zodpovedná za produkciu tzv. reaktívnych kyslíkových foriem (ROS, z angl. reactive oxygen species), ktoré môžu ireverzibilne poškodiť proteíny a ich funkciu v membráne mitochondrií. K týmto proteínom patria aj iónové kanály, ktorých porucha môže spôsobiť vážne poškodenie funkcie buniek alebo dokonca ich smrť [1]. Pre kardiomyocyty je nevyhnutné udržiavať kontinuálny prísun ATP a transmembránový potenciál vnútornej membrány mitochondrie [2]. V našej štúdii sme sa venovali výlučne iba mitochondriovým chloridovým kanálom srdcových buniek. Srdcia potkanov boli nastrihané na kašu a zhomogenizované. Pre získanie čistej frakcie submitochondriových vezikúl (SMP) sme použili diferenciálnu centrifugáciu v Percoll gradiente. Na zisťovanie jednokanálových (tzv. „single-channel“) charakteristík sme použili metódu inkorporácie iónových kanálov do planárnej lipidovej dvojvrstvy (BLM, z angl. bilayer/black lipid membrane). Redoxnú reguláciu týchto kanálov sme sledovali aplikovaním oxidovanej a redukovanej formy glutatiónu (GSH a GSSG) a  ditiotreitolu (DTT), bežne používaného reduktanta disulfidových väzieb, na obe strany kanálu (tzv. cis a trans strana). Výsledky sme porovnali s článkom autorov Singh & Ashley z roku 2007, ktorí zistili, že rôzne pomery GSH:GSSG na cis strane kanálu nemali žiadny efekt, ale zvyšujúci sa pomer GSH:GSSG 2:1, resp. 1:1 v trans časti signifikatne znížil amlitúdu elektrického prúdu iónov prechádzajúcich cez kanál [3]. V našich experimentoch spomínané látky nemali žiaden vplyv na biofyzikálne charakteristiky kanálu ani v cis, ani v trans časti. DTT z cis strany nemalo žiadny efekt, ale koncentrácia 500 µmol/l z trans strany spôsobila zvýšenie reverzného potenciálu chloridového kanálu. Z trans oddielu pri pridaní DTT nemáme dostatok experimentov ani pridaných koncentrácií, teda navrhujeme v budúcnosti dôkladnejšie preskúmať vplyv DTT z trans strany. Zistili sme však, že chloridové kanály mitochondrií sú napäťovo závislé. S rastúcim kladným napätím sa zvýšila pravdepodobnosť otvorenia kanálu Popen.

Príspevok bol prezentovaný v rámci fakultného kola Študentskej vedeckej konferencie FMFI UK 2016. Práca bola podporená projektom VEGA/2/0146/16.
[1] Nishida, H., Matsumoto, A., Tomono, N., Hanakai, T., Harada, S. a Nakaya, H. Biochemistry and physiology of mitochondrial ion channels involved in cardioprotection. FEBS Letters. 2010, 584(10), 2161-2166.
[2] O'Rourke, B., Cortassa, S. a Aon, M.A. Mitochondrial ion channels: gatekeepers of life and death. Physiology (Bethesda). 2005, 20, 303-315.
[3] Singh, H. a Ashley, R.H. CLIC4 (p64H1) and its putative transmembrane domain form poorly selective, redox-regulated ion channels. Mol Membr Biol. 2007, 24(1), 41-52.
It appears that your web browser does not support PDF documents viewing

Discussion

Záver a legenda grafov 19.05.2016 14:12
Dobrý deň Janka, gratulujem k peknej práci a vhodne zostavenému posteru. K práci mám metodický komentár a jednu otázku, keďže Váš záver obsahuje konštatovanie zistených výsledkoch, ale nepok...Show all comments
Re: Záver a legenda grafov 26.05.2016 13:00
Dobrý deň, ďakujem Vám veľmi pekne za Váš komentár a poznámky, určite ich v budúcnosti využijem. Rada by som sa vyjadrila k Vašej otázke: "čím si vysvetľujeme, že GSH:GSSG a DTT nemalo...Show all comments
Re: Re: Záver a legenda grafov 26.05.2016 13:27
Ďakujem za profesionálnu odpoveď. Ad.interpretácie nesignifikantných nálezov, áno, neurobili ste interpretačnú chybu (aj keď ste si to pri písaní príspevku možno do detailov neuvedomovali), pre...Show all comments
Re: Re: Re: Záver a legenda grafov 26.05.2016 13:33
Ďakujem pekne za Váš komentár. JH
Partners
General partner

Partners
Special thanks
Media partners
Inzercia zadarmo
Organizer