jazyk / language:
Interactive Conference
of Young Scientists
Back to section

Vplyv zatupenia mutačnej kazety na účinnosť transformácie

Discussion interaction
Overall design
Scientific work
Show all evaluations

Go to the discussion

Vplyv zatupenia mutačnej kazety na účinnosť transformácie

Veronika Lišková 1 Hana Boňková 1 Ivana Petrovičová 1 Aneta Lichvariková 1 Ján Krahulec 1

1PRIF UK, Bratislava 4, Slovenska republika
veroni.liskova@seznam.cz

V životnom cykle sa druhy z rodu Candida vyskytujú diploidné alebo aneuploidné, preto je zložité ich študovať. Genetické metódy ako génové mapovanie priniesli len obmedzené množstvo informácií o ich genóme. Preto technológie rekombinantnej DNA predstavujú jedinú účinnú cestu k analýze genetickej informácie u Candidy, a to si vyžaduje efektívnu metódu transformácie pre efektívny prenos cudzorodej DNA do jej genómu [1]. Cieľom práce je predostrieť získané poznatky o vplyvu zatupenia mutačnej kazety na účinnosť transformácie po jej vnesenie do chromozómu C. utilis. V práci rozoberáme vplyv zatupovania pomocou jednotlivých polymeráz a ich vplyv na výslednú účinnosť transformácie. Na štiepenie plazmidu používame restrikčnú endonukleázu HindIII, ktorá zanecháva 5´prečnievajúce konce. V pokusoch používame 3 rôzne DNA polymerázy. Princíp zatupovania GoTaq DNA polymerázou spočíva v tom, že dosyntetizuje reťazce, no nezatupí konce úplne, ale na 3´konce pridáva adenozín [2]. DreamTaq polymeráza taktež pridáva na 3´konce adenozín. Rozdiel medzi týmito dvoma polymerázami je v tom, že GoTaq DNA polymeráza je Hot Start a teda si vyžaduje aktiváciu v denaturačnom kroku pri 95°C, kým DreamTaq DNA polymeráza nevyžaduje denaturačný krok [3]. Posledná nami používaná polymeráza je T4 DNA polymeráza, ktorá je schopná zatupovania pri laboratórnej teplote a zanecháva tupé konce.

Práca vychádza z projektu: Univerzitný vedecký park Univerzity Komenského v Bratislave. ITMS: 26240220086 , Vybudovanie Kompetenčného centra pre výskum a vývoj v oblasti molekulárnej medicíny. ITMS: 26240220071.
 [1] Becher D., Stephen G. Oliver (1995) Methods Mol Biol 47, p. 291-302.
 [2] Sambrook J., Russell D. W. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 3rd ed.
 [3] ThermoScientific.
It appears that your web browser does not support PDF documents viewing

Discussion

Comment first
Partners
General partner

Partners
Special thanks
Media partners
Inzercia zadarmo
Organizer