jazyk / language:
INTERAKTÍVNA KONFERENCIA
MLADÝCH VEDCOV
Späť do sekcie

Detekcia tioglykozidáz vo vláknitých hubách z rodu Trichoderma


Prejsť do diskusie

Detekcia tioglykozidáz vo vláknitých hubách z rodu Trichoderma

Helena Galádová 1 Martin Šimkovič 1

1Slovenská technická univerzita v Bratislave, Fakulta chemickej a potravinárskej technológie, Ústav biochémie a mikrobiológie, Bratislava, Slovenská republika
galadova.helena@gmail.com

Myrozinázy (β-tioglukozid glukohydrolázy) sú súčasťou dômyselného obranného systému rastlín a slúžia na aktiváciu glukozinolátov, sekundárnych metabolitov, ktoré samotné majú iba obmedzenú biologickú aktivitu. V prípade mechanického porušenia rastlinných pletív dochádza ku kontaktu myrozinázy s glukozinolátmi a k hydrolytickému štiepeniu ich tioglykozidovej väzby. Okrem D-glukózy vzniká aj nestabilný aglykón, ktorý sa spontánne rozkladá na rôzne druhy produktov, akými sú napríklad tiokyanáty, izotiokyanáty alebo nitrily. Tvorba týchto produktov je závislá od viacerých faktorov, ako je druh substrátu, pH alebo dostupnosť iónov železa [1]. Už dávnejšie sa zistilo, že degradačné produkty glukozinolátov chránia rastliny pred účinkom hmyzu a fytopatogénov [2], v súčasnom období priťahujú pozornosť najmä vďaka ich schopnosti potláčať vznik a rozvoj rakoviny [3] a ich využiteľnosti v chemickej syntéze pri výrobe ušľachtilých zlúčenín [4]. Prevažne z týchto dôvodov sa myrozinázy intenzívne študujú a zároveň sa hľadajú nové alternatívne zdroje týchto enzýmov, ktoré by sa vyznačovali zaujímavými molekulovými vlastnosťami. Najbohatším zdrojom sú rastliny z čeľade kapustovitých, prevažne v zrelých semenách, napríklad v brokolici (Brassica oleracea var. Italica), kapuste obyčajnej (Brassica oleracea), repke olejnej (Brassica napus) alebo horčici žltej (Brassica juncea). Samotná myrozináza nie je výlučne exprimovaná len v rastlinách, objavená bola aj v mnohých mikroorganizmoch. Typickým príkladom sú vláknité huby z rodu Aspergillus spp. a Fusarium spp. [5]. Hoci prítomnosť myrozináz(y) v rode Trichoderma nebola nikdy preukázaná, jej prítomnosť v hube indikuje samotný fakt, že členovia tohto rodu dokážu existovať v symbióze s rastlinami [6] a spomedzi pôdnych eukaryotických mikroorganizmov patria k tým, ktoré sú relatívne odolné voči účinku izotiokyanátov [7].

Hlavným cieľom tejto práce je preskúmať schopnosť druhov z rodu Trichoderma tvoriť myrozinázy počas ich rastu a diferenciácie vyvolanej svetlom. Súčasťou štúdie je charakterizácia vlastností fungálnych myrozináz na základe pozorovania vplyvu fyziologicky účinných látok na enzýmovú aktivitu týchto enzýmov.

Táto práca vznikla s podporou projektu APVV-16-0439.
[1] Bones, A. M. a kol.: The myrosinase-glucosinolate system, its organization and biochemistry. Physiol. Plant 97, 194–208 (1996). [2] Rask, L. a kol.: Myrosinase: gene family evolution and herbivore defense in Braddicaceae. Plant Molecular Biology 42, 93–113 (2000). [3] Huang, M. T. a kol.: Cancer chemoprevention by phytochemicals in fruits and vegetables. Food Phytochemicals for Cancer Prevention I (ACS Symposium Series) 1, 2–16 (1994). [4] Gueyrard, D. a kol.: Reactivity of a chiral 1, 3-oxazolidine-2-thione obtained from vegetable source through chemo-enzymatic processing. Heterocycles 52, 827–634 (2000). [5] Smits, J. P. a kol.: Glucosinolate degradation by Aspergillus clavatus and Fusarium oxysporum in liquid and solid-state fermentation. Appl. Microbiol. Biotechnol. 38, 696–701 (1992). [6] Zeilinger, S. a kol.: Friends or foes? Emerging insights from fungal interactions with plants. FEMS Microbiol. Rev. 40, 182–207 (2016). [7] Smith, J. a Kirkegaard, J. A.: In vitro inhibition of soil microorganisms by 2-phenylethyl isothiocyanatePlant Pathology 51, 585–593 (2002). 
Zdá sa, že Váš internetový prehliadač nepodporuje prehliadanie PDF dokumentov.
Pre zobrazenie súboru je potrebné maš nainštalovaný Adobe Reader.

Diskusia

Cistota a aktivita enzymu 01.05.2018 11:59
Dobry den, chcela by som sa opytat, ako boli ziskane enzymy na meranie myrozinazovej aktivity? Enzymovu aktivitu mate v grafe vztiahnutu na mg proteinu, ale v metodike prace purifikaciu neuvadzate. Dakujem.
Re: Cistota a aktivita enzymu 02.05.2018 13:30
Dobrý deň, ďakujem Vám za otázku. Áno máte pravdu purifikačné kroky nie sú uvedené s toho dôvodu, že tieto experimenty sú predbežne vykonané na hrubých homogenátoch. Samotnú purifikáciu m...Zobraziť celý komentár
vytaznost myrozinaz 09.05.2018 07:30
Dobry den, zaujimalo by ma, ak sa to vobec da vycislit, aka je produkcna sila vlaknitych hub rodu Trichoderma vzhladom na ziskavanie myrozinaz pre ucely dalsich experimentov. Dakujem, ZB
Re: vytaznost myrozinaz 09.05.2018 11:16
Dobrý deň, ďakujem za opýtanie. Na základe doterajších experimentov nie je možné určiť produkčnú silu Trichoderma vzhľadom na myrozinázy. Na základe enzýmovej aktivity to nie je možné zho...Zobraziť celý komentár
glykozidázy 29.05.2018 08:21
Zaujímavá téma, dúfam že bude mať pokračovanie. Trošku si dajte pozor na terminplógiu - nemerali ste glukozidázové, ale glykozidázové aktivity.
Sú na trhu čisté B-glukozidázy z Tricho...
Zobraziť celý komentár
Re: glykozidázy 30.05.2018 17:51
Dobrý deň, ďakujem Vám za upozornenie ohľadom terminológie. V budúcnosti sa podobným nepresnostiam budem snažiť vyvarovať.
Momentálne nemám žiadnu vedomosť o tom, že by existovali na t...
Zobraziť celý komentár
Naši partneri
Generálny partner

Partneri
Špeciálne poďakovanie
Mediálni partneri
Inzercia zadarmo
Usporiadateľ