Chemoenzymatická syntéza 4-nitrofenyl kafeátu – nového substrátu pre kafeoyl esterázy

Dobry den, lipaza PS vychadza jednoznacne z celej serie pokusov ako naj kandidat na dalsie skumanie. Budete presnejsie kvantifikovat selektivitu? Kedze je enzym pomerne selektivny (acetyl vs. kafeyl), stalo ...Zobraziť celý komentárby za pokus patrat ci sa za urcitych podmienok da dosiahnut aj regioselektivita voci acylom (acetylom) na benzenovom jadre? Derivaty III aj IV su reaktivne estery, nezistili ste acylaciu aminoskupin enzymu?

Palo, nedalo mi to a tak som skúmal regioselektivitu lipazy PS pri menšej koncentrácií enzýmu a podľa TLC platničiek je zjavné, že lipáza najskôr deacetyluje jeden z acetylov pričom vzniká monoa...Zobraziť celý komentárcetlykafeát a až potom deacetyluje aj druhý acetyl. Nie je mi však známe, ktorý z tých dvoch je deacetylovaný prvý...
Ale ešte raz ďakujem za nápad.

Dobrý deň,
pre naše účely bola dôležitá preferencia enzýmu k acetylesterázovej aktivite pred kafeoylesterázovou a to k obom acetylom, ako je to znázornené na schéme. Preto sme po nájdení...Zobraziť celý komentár� vhodného enzýmu ďalej neskúmali či enzým preferuje jeden z acetylov ani nemáme v pláne kvatifikovať jeho selektivitu (aj kvôli vysokej cene enzýmu). Z literatúry sú známe enzýmy ako PPL alebo CCL, ktoré regioselektívne deacetylujú polyacetoxybenzoové kyseliny, resp. ich estery. Popísané prípady však pracovali s viac stabilnými estermi týchto derivátov kys. benzoovej ako metyl- a etyl- estery. V našom prípade, je ester veľmi reaktívny, takže by pravdepodobne došlo k hydrolýze aj kafeoylesterovej väzby.
Lipáza PS bola na deacetyláciu substrátu III. použitá viac krát a nebol pozorovaný pokles jej aktivity, preto nepredpokladáme možnosť acylácie aminoskupín enzýmu.

Zdravim, rad by som sa spytal, ci ste skusili esterifikaciu (z chloridu V) v dvojfazovom usporiadani: aby v halogenovanom rozpustadle bol chlorid a fenol (nedeprotonovany, takze transesterifikacia by nemala ...Zobraziť celý komentársancu) a baza by bola separe vo vode. Ako ste oddelovali Cy2 mocovinu pri synteze III? Pacila sa mi selektivna deprotekcia. Zaujimalo by ma (ako org chemika moc enzymologiou nepostihnuteho), ze ci podobna selektivita sa da dosiahnut aj pri inych acetylovanych fenoloch, ci inych substratoch, pripadne, ci sa da ta selektivita jednotliveho enzymu nejako modulovat?
dakujem za odpovede

Dobrý deň,
dvojfázové usporiadanie reakčnej zmesi sme nemohli použiť kvôli takmer istej hydrolýze chloridu kyseliny a aj produktu - aktivovaného esteru v prítomnosti vody.
Močovinu sm...Zobraziť celý komentáre z reakčnej zmesi odstraňovali jej precipitáciou po pridaní acetónu.
Samozrejme, selektívna deprotekcia sa dá dosiahnuť aj na iných fenolických derivátoch napr. kyseline ferulovej alebo galovej. Je však otázkou výberu vhodných podmienok a enzýmového preparátu, preto podobný proces musí predchádzať skrínig. Selektivita konkrétneho enzýmu sa dá viac alebo menej modulovať zmenou podmienok reakcie, hlavne rozpúšťadla.

Aha. Este ohladne tej esterifikacie v dvoch fazach - skusali ste to niekedy? Lebo ja z vlastnej skusenosti mozem povedat (aromt. chlorid + fenol), ze to ide, ak sa ako baza pouzije nieco na sposob hydrouhlic...Zobraziť celý komentáritanu. Ak su dve fazy, a fenol + chlorid sa rozpustaju v organike (toluen, alebo halogenovane), tak v homogennej faze bezi reakcia radovo rychlejsie nez heterogenne - esterifikacia namiesto hydrolyzy. Mam dojem, ze aj ten ester by mal vodu bez pritomnosti silnej bazy prezit.

Nebránime sa novým nápadom. Kapling pomocou DCC bol v tej chvíli pre nás najrozumnejšou voľbou. Postup možno vyskúšame, ale momentálne sme už v ďalšej fáze práce. Ešte raz, ďakujeme za podnet.