jazyk / language:
Interactive Conference
of Young Scientists
Back to section

Štúdium glykozylačných zmien biomarkerov kolorektálneho karcinómu pomocou glykoproteínovej microarray využívajúcej lektíny


Go to the discussion

Štúdium glykozylačných zmien biomarkerov kolorektálneho karcinómu pomocou glykoproteínovej microarray využívajúcej lektíny

Martina Zámorová 1 Alena Holazová 1 Dragana Robajac 2 Goran Miljuš 2 Miloš Šunderić 2 Romana Masnikosa 2 Vesna Malenković 3 Blagoje Đukanović 3 Peter Gemeiner 1 Olgica Nedić 2 Jaroslav Katrlík 1

1Oddelenie glykobiotechnológie, Chemický ústav, Slovenská akadémia vied, Dúbravská cesta 9, 845 38 Bratislava, Slovensko
2Institute for the Application of Nuclear Energy (INEP), University of Belgrade, Banatska 31b. Zemun, Serbia
3Clinical-Medical-Center „Bežanijska kosa“, Belgrade, Serbia
zamorovamartina@gmail.com

Kolorektálny karcinóm (KRK) je tretím najčastejším typom rakoviny v rozvinutých krajinách so štvrtou najvyššou mortalitou spomedzi všetkých onkologických ochorení [1]. Príčinou vysokej mortality je oneskorená diagnóza. Ak sa však nádor zachytí včas je veľmi dobre liečiteľný. Glykozylačné zmeny asociované s onkogénou transformáciou boli prvý krát popísané pred viac ako 60-timi rokmi [2,3]. Glykány sú zahrnuté v základných molekulárnych a bunkových biologických procesoch vyskytujúcich sa v nádoroch, ako napríklad bunková signalizácia a komunikácia, disociácia a invázia nádorových buniek, interakcie bunka-matrix, angiogenéza, modulácia imunity a tvorba metastáz. Nádorové bunky predstavujú široký rozsah glykozylačných zmien v porovnaní s ich netransformovanými náprotivkami. Preto množstvo a kvalita glykozylácie, ako aj zmeny v glykánových štruktúrach môžu slúžiť ako dôležité biomarkery signalizujúce nástup a priebeh mnohých ochorení. Glykoprofilácia by tak mohla slúžiť ako nástroj pre skorú diagnostiku. Cieľom tejto práce bol vývoj, optimalizácia a aplikácia glykoproteínovej microarray využívajúcej lektíny pre glykoprofiláciu potencionálnych biomarkerov KRK súvisiacich s IGF (insuline-like growth factor) systémom a  detekcia glykozylačných zmien u pacientov s KRK. Na analýzu glykozylačného profilu sme použili glykoproteínovú microarray využívajúcu lektíny, proteíny, ktoré sú schopné špecificky a reverzibilne viazať glykány. Vzorky obsahujúce glykoproteíny boli najprv nanesené na povrch microarray čipu pomocou robotického microarray printera a následne boli imobilizované s využitím vhodnej povrchovej chémie, pričom po imobilizácii sa zablokovali neobsadené aktívne skupiny na povrchu čipu. Detekcia glykánových štruktúr bola založená na biorozpoznávaní pomocou lektínov, ktoré špecificky interagujú s glykánovými štruktúrami [4]. Po inkubácii pripaveného biočipu s biotinylovanými lektínmi, a v ďalšom kroku s konjugátom stretavidín – fluorofór, bola detegovaná intenzita signálu pre jednotlivé vzorky pomocou microarray skeneru. Glykoproteínovú microarray využívajúcu lektíny sme použili na sledovanie glykozylačných zmien potencionálnych biomarkerov vo vzorkách proteínov IGF systému, IGFBP-3 (IGF-binding protein 3), IGF 1R (IGF 1 receptor) a IGF 2R (IGF 2 receptor). Vzorky boli izolované zo: (i) sér pacientov s KRK a zdravých jedincov, (ii) cytozolovej frakcie získanej z nádorového a zdravého črevného tkaniva pacientov s KRK a (iii) frakcie membránových proteínov získanej z nádorového a zdravého črevného tkaniva pacientov s  KRK.

Táto práca bola realizovaná vďaka bilaterálnym grantom APVV-SK-SRB-2013-0028 a 451-03-545/2015-09/01.
1. Ferlay, J., et al., Cancer incidence and mortality worldwide: Sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. International Journal of Cancer, 2015. 136(5): p. E359-E386.
2. Hakomori, S.I. and W.T. Murakami, Glycolipids of hamster fibroblasts and derived malignant-transformed cell lines. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 1968. 59(1): p. 254-261.
3. Ladenson, R.P., S.O. Schwartz, and A.C. Ivy, INCIDENCE OF THE BLOOD GROUPS AND THE SECRETOR FACTOR IN PATIENTS WITH PERNICIOUS ANEMIA AND STOMACH CARCINOMA. The American Journal of the Medical Sciences, 1949. 217(2): p. 194-197.
4. Katrlík, J., et al., Glycan and lectin microarrays for glycomics and medicinal applications. Medicinal Research Reviews, 2010. 30(2): p. 394-418.
It appears that your web browser does not support PDF documents viewing

Discussion

Otázka 30.05.2016 14:26
Chcela by som sa spýtať prečo ste si ako ak potencionálne biomarkery vybrali práve IGF? Mohli by ste tiež stručne zhrnúť načo kokrétne poukazujú Vaše závery? Ďakujem.
Re: Otázka 03.06.2016 10:31
Ďakujem za otázky. Potencionálne glykobiomarkery vyberáme na základe prehľadu literatúry doterajších sledovaných glykoproteínov v KRK. Zohľadňujeme však koncentráciu glykoproteínu v sére, ab...Show all comments
Pacienti a zámer 31.05.2016 19:12
Dobrý deň Martina, nenašla som charakteristiku pacientov - v akom štádiu ochorenia sa nachádzali? Obecne je molekulárna diagnostika málo senzitívna v počiatočných štádiách nádorového procesu...Show all comments
Re: Pacienti a zámer 03.06.2016 12:58
Ďakujem za otázky Iveta. Sérum aj nádorové/zdravé tkanivo bolo získané od pacientov, ktorí boli diagnostikovaní a liečení v Clinical-Medical-Center Bežanijska kosa v Belehrade. Pacienti boli kla...Show all comments
Re: Re: Pacienti a zámer 03.06.2016 13:02
Ďakujem za odpoveď Martina a želám veľa úspechov v tejto dôležitej oblasti onkologickej diagnostiky (pomaly nie je na Slovensku rodina, v ktorej by sa táto diagnóza nevyskytla :( Výskum nepochybn...Show all comments
Partners
General partner

Partners
Special thanks
Media partners
Inzercia zadarmo
Organizer